Tetrahydrobiopterin jako alternatywa leczenia łagodnych fenyloketonurii cd

W okresie badania noworodki były karmione piersią, podczas gdy starsze dzieci otrzymywały standardowe spożycie białka (10 mg fenyloalaniny na kilogram) w okresie od sześciu do ośmiu godzin po prowokacji tetrahydrobiopteryną. In Vivo Analiza utleniania fenyloalaniny
Szybkość utleniania fenyloalaniny określono dwukrotnie (w dwóch różnych dniach) u każdego dziecka – raz bez leczenia i raz podczas leczenia tetrahydrobiopteryną (10 mg na kilogram w ciągu 24 godzin). Testy przeprowadzono po czterogodzinnym poście u niemowląt i nocnym postu u starszych dzieci. Łącznie 6 mg na kilogram L- [1-13C] fenyloalaniny (Euriostop) rozpuszczonej w 25% roztworze dekstrozy (2 mg na mililitr) podano doustnie. Próbki oddechu zebrano następnie w ciągu 180 minut i przechowywano w próżniowych szklanych probówkach aż do analizy za pomocą spektrometrii masowej ze współczynnikiem izotopowym (deltaS, Thermoquest). Odzyskiwanie węgla-13 w próbkach oddechowych obliczono w sposób opisany przez Treacego i wsp., 15 przyjmując całkowitą produkcję dwutlenku węgla w wysokości 300 mmol na godzinę na metr kwadratowy powierzchni ciała.6,17 Ilość znakowanego dwutlenku węgla utworzonego wyrażono jako skumulowany procent podanej dawki w funkcji czasu. Na ważność wyników u noworodków może mieć wpływ dieta lub fakt, że pobieranie próbek oddechowych jest trudniejsze niż w przypadku starszych pacjentów. Jednak podstawowy procent węgla-13 mierzony w czasie 0 nie różnił się istotnie między noworodkami i starszymi dziećmi. Wartości uznawano za poniżej granicy wykrywalności, gdy intensywność sygnału nadmiaru atomu (wyrażona jako procent w czasie t, uzyskana przez odjęcie średniej wartości linii bazowej) nie pozwalała na wystarczające odróżnienie od atmosferycznego dwutlenku węgla-13. Średnio, mniej niż z 27 kolejnych pomiarów dwutlenku węgla uzyskanych podczas 180 minut indywidualnych badań było niemożliwych do interpretacji u starszych dzieci, a mniej niż 2 z 27 było niemożliwie do interpretacji u noworodków, a zmiany te miały znikomy wpływ na ostateczne obliczenia. W celu porównania pacjentów, znormalizowaliśmy dane, wyrażając indywidualne wyniki jako procent średniej wartości dla grupy kontrolnej, która składała się z 12 zdrowych dzieci (wiek, od 2 dni do 13 lat).
Mutacyjna analiza
DNA ekstrahowano z leukocytów zgodnie ze standardowymi protokołami. Trzynaście fragmentów genomowych obejmujących całą sekwencję kodującą i intronowe sekwencje egzonowe genu hydroksylazy fenyloalaniny zostały zamplifikowane przez reakcję łańcuchową polimerazy, a następnie bezpośrednie sekwencjonowanie.
Mapowanie mutacji genu hydroksylazy fenyloalaniny
Skonstruowaliśmy model pełnej długości monomeru hydroksylazy fenyloalaniny związanej z tetrahydrobiopteryną z kryształów kilku skróconych form19-22, nakładając domeny katalityczne za pomocą narzędzi dostarczonych przez SWISS-MODEL / Swiss-Pdb Viewer. 23
Wyniki
Wpływ tetrahydrobiopteryny na stężenie fenyloalaniny we krwi i szybkość utleniania fenyloalaniny
Ryc. 1. Ryc. 1. Stężenia fenyloalaniny we krwi przed ładowaniem fenyloalaniny (Phe) oraz przed i po prowokacji Tetrahydrobiopterinem (BH4)
[więcej w: przygotowanie do badania pet, honorowy dawca krwii, zostan dawca szpiku ]
[przypisy: ośrodek leczenia uzależnień kraków, stomatolog bemowo, orsalit ulotka ]